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细胞培养技术在生物研究领域内是必不可少的核心环节,在培养过程中面临的一个严重问题就是细胞污染,其中支原体是最主要的污染源。
支原体在光学显微镜下不可见,而且被支原体污染的细胞培养基在一般情况下往往并不浑浊,细胞受损程度也不明显,形态很少改变,因此细胞被支原体污染后很难察觉。
细胞一旦被支原体污染后,支原体会消耗细胞培养基中的营养物质,代谢产物不断积累,会导致细胞培养环境中pH值的改变,诱导或抑制某些细胞因子的表达,会影响培养细胞的代谢和增殖特征。
能够造成细胞污染的支原体种类有很多,有些细胞甚至同时感染2种以上的支原体。由于支原体体积很小,直径约在0.2-2.0pm之间,可以通过滤膜而直接造成培养基或血清的污染。
从形态结构上,支原体形态多变,多吸附在细胞表面或分散于细胞与细胞之间,是一类没有细胞壁的微生物,因此对作用于细胞壁类的抗生素不敏感。
常用的检测方法有培养法、荧光染色法、PCR法和电镜观察法。
荧光染色法是用特异荧光染料染色后在荧光显微镜下进行检测,荧光染料是一种能和DNA特异结合物质,如果检测样品为支原体污染,则附在细胞表面和分散在细胞与细胞之间的支原体DNA着色,在荧光显微镜下可见,飞凡检测生物的MycoTest Stain,可以快速检测支原体;