病毒灭活目的:检测原子力显微镜检测对单纯疱疹病毒的直接灭活作用——飞凡检测重要的药用植物成分Pentagalloylglucose( PGG)对单纯疱疹病毒I型(HSV - 1)和单纯疱疹病毒I型(HSV - 2)的直接灭活作用。
方法:利用空斑减数实验检测到PGG的直接灭活作用。利用原子力显微镜采用轻敲模式扫描成像( AFM)观察PGG对HSV -1的病毒囊膜的破坏作用。
结果:PGG的半数抑制浓度(ICgo)分别为1. 88+0.19 μM和2.59+0.35μM。AFM呈现了单纯疱疹病毒三维图像,可见病毒表面有凹凸不平的囊膜包裹,而PGG处理后的病毒无囊膜,降低了病毒的感染性。
结论:原子力显微镜是一种制样简单、真实可信的新型病毒形态学研究工具,为病毒检验和抗病毒药物的开发提供了新的手段。
1,2,3,4,6-五-0-没食子酰基-b-D-葡萄糖从余甘子( Phyllanthus emblica L )的枝叶中提取而得 ,具有多种生物活性。余甘子来源于大戟科( Euphorbiaceae)叶下珠属植物( Phyllanthus)的成熟果实,又名滇橄榄、油柑,广泛分布于西亚北非、印度南部以及东南亚各地。我国西南至东南沿海地区均有分布。余甘子应用于我国的中草药、藏药、蒙药、傣药、维吾尔药等民族药体系以及印度寿命吠陀传统药物体系中，均具有十分悠久的用药史。
单纯疱疹病毒属于疱疹病毒科、a疱疹病毒亚科,是*早发现的人类疱疹病毒,分为I型(HSV-1)与II型(HSV -2)两个血清型,其感染十分普遍，呈全球性分布。HSV-1多感染口、唇、眼的皮肤与粘膜，以及中枢神经系统,偶见于生殖器感染;HSV-2多与新生儿感染和生殖器感染相关。而目前临.床常用的治疗药物主要是无环鸟苷( ACV)等核苷类药物,其作用靶点是病毒DNA聚合酶，进而影响病毒的复制，但容易产生耐药性抗病毒谱窄且价格高昂，故筛选研发毒性小，作.用机理不同的抗病毒药物尤为重要。
原子力显微镜检测Pentagalloylglucose对单纯疱疹病毒的直接灭活作用
HSV为有囊膜的DNA病毒,病毒粒子直径约120 nm ~150 nm,其结构可分为四部分:(1)脂质囊膜,其上含11种病毒糖蛋白突起,大多与病毒吸附、穿人宿主细胞、诱导细胞间融合以及刺激机体免疫反应相关;(2)皮层,主要含有a反式诱导因子(x TIF)、病毒体宿主关闭蛋白( VHS)等病毒间层蛋白;(3) 20面体核衣壳;(4)病毒基因组及DNA结合蛋白构成的核心。
长期以来,病毒形态结构的研究主要依赖于透射电子显微镜(TEM)和X2射线衍射技术,但电镜制样复杂并需要真空观察,X2线衔射技术需要获得晶体或其他高度有序的方式才能进行分析,这些缺陷限制了两者的广泛应用。原子力显微镜( AFM)是由德裔物理学家G. Binnig 等于1986年发明 ,是扫描探针显微镜家族的重要成员之一,是一种适合于观察非导电物质的生物力学工具。其横向分辨率为2 nm~3 nm,纵向分辨率为0.5 nm。它可以在接近生理环境的大气或液体条件下成像,获得所观察物体直观的三维表面信息，因此在核酸、蛋白质、细菌、病毒等生物结构的研究中较其它观测手段更具明显优势,并成为改造原子分子的手段。AFM用于病毒研究的优势不仅在于制样简单,对病毒结构影响小,更重要的是可以在生理条件下，动态观察病毒的形态及生理过程。Turner等利用从AIDS病毒中提取的逆转录酶修饰AFM横梁，使之成为一种能检测抑制酶的活力和筛选使AIDS病毒失活药物的方法。
AFM的探针位于微悬臂的底面末端,微悬臂对力非常敏感。AFM主要有两种成像模式,接触模式和轻敲模式。接触模式扫描时,针尖一直与样品表面接触,优点是扫描速度快，可获得原子级的分辨率,缺点是横向力会影响图像的原始特征,对柔软的样品易造成损害。轻敲模式扫描时，微悬臂在其共振频率或接近此频率处振动，针尖间断地“轻敲”样品表面，这种模式的优点是消除了横向力,针尖与样品之间每次接触的时间很短，对样品的损坏小，适用于柔软生物分子的研究。