细胞永生化慢病毒检测 细胞永生化检测 细胞永生化服务

飞凡检测提供细胞永生化慢病毒检测 细胞永生化检测 细胞永生化服务

原代细胞经过一定数量的增殖，和一定次数的分裂后达到复制衰老的状态，从而限制了衰老或受损细胞的增殖。GeneCopoeia提供细胞永生化试剂，利用重组慢病毒携带基因，如simian virus 40 (SV40)大T抗原和人端粒酶逆转录酶蛋白(hTERT)诱导永生化，可显著延长原代细胞的寿命。

GeneCopoeia Lentifect? 纯化慢病毒生产经过标准的实验流程，使用高质量质粒DNA提取试剂盒、EndoFectin? 转染试剂及TiterBoost? 慢病毒滴度增强试剂。使用第三代自失活包装系统，符合2级生物安全等级的要求。

1. 永生化慢病毒由CMV/EF1α启动永生化诱导基因的有效表达，并带有筛选抗性（可选）。

2. 提供25 μl*4管约108 TU/ml的慢病毒。慢病毒进行干冰寄送，请收到后立即放到-80℃保存。避免反复冻融影响病毒滴度。

3. 慢病毒表达结构经过全长测序、酶切、用基因特异性引物和载体特异性引物进行PCR大小验证。慢病毒产品无细菌、真菌及常见支原体污染。

飞凡检测细胞永生化实验操作

原代细胞铺板，6孔板，0.5-2 x105/孔

将冻存在-80℃的慢病毒取出，冰浴融化

使用GFP慢病毒感染原代细胞，明确细胞MOI，以及明确细胞药物筛选*小致死浓度后，使用永生化慢病毒感染细胞。

感染第二天，更换新鲜细胞培养液，继续培养。

感染72小时后，更换带有筛选抗性的新鲜细胞培养液，继续培养。

得到筛选抗性阳性细胞克隆后，即可进行永生化测试。