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CHO细胞库检测CHO细胞检测CHO细胞鉴别CHO细胞库鉴定

发布时间:2023-07-12        浏览次数:18        返回列表
前言:飞凡检测CHO细胞属于成纤维细胞,最早由Theodore Puck在1956年从中国仓鼠卵巢细胞中分离出来,被发现可以无限分裂。CHO细胞可以
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飞凡检测CHO细胞属于成纤维细胞,最早由Theodore Puck在1956年从中国仓鼠卵巢细胞中分离出来,被发现可以无限分裂。CHO细胞可以贴壁或悬浮生长,容易基因突变,较易进行基因转染,可以对蛋白进行翻译后修饰,可以进行化学选择,因此是良好的哺乳动物基因表达宿主细胞。它本身很少分泌CHO内源蛋白,因此对目标蛋白分离纯化工作十分有利。由于该细胞存在遗传缺陷,无脯氨酸合成基因,培养过程中需在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。

CHO细胞又分为野生型和突变体细胞两大类:

1. CHO-K1细胞株:1957年诞生,为早期CHO细胞的亚克隆。接近野生型细胞。但1968年突变分析显示,CHO-K1细胞缺乏甘氨酸生物合成的基因。冻存液成分通常为50%基础培养基+40%胎牛血清+10%DMSO;培养基成分通常为Ham's F-12K+10% FBS+1%双抗。

2. 二氢叶酸还原酶营养缺陷突变细胞株(CHO-DHFR-):DHFR系dihydrofolate reductase的缩写。该细胞系为DHFR基因缺陷型。DHFR用于催化二氢叶酸还原成四氢叶酸。突变体不能合成四氢叶酸。因而不能在缺乏次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷(thymidine)的培养基上生长。只有导入DHFR或者培养基中添加次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷能生长。因此DHFR可作为筛选标记或报告基因。

CHO-DXB11(又被称为DUKX)、CHO-DG44细胞均属于DHFR缺陷型细胞。CHO-DXB11在1980年通过CHO-K1细胞化学突变而来。CHO-DG44在1983年诞生。CHO-DG44具有DHFR双缺陷,被敲除了2个位点。而CHO-DXB11只被敲除了1个位点,另一个位点为错义突变,因此有可能自动回复到DHFR功能状态,因此DXB11不能用于筛选。DG44可用于筛选,在工业使用也最广泛。

氨甲喋呤(MTX)是DHFR的拮抗剂,可使DHFR大量表达,因此可使细胞外源基因的拷贝数扩增并得到较高表达。

3. CHO-S为CHO-K1驯化后的悬浮细胞,1971年出现,可在生物反应器中大规模培养。

CHO-K1、CHO-DG44和CHO-S是工业生产最常见的三种细胞系。其中DGFR基因扩增系统是最常用的基因扩增选择系统。但该系统也存在一些不足,如该方法需要较高浓度的MTX,而外源基因表达水平不高,增加了筛选细胞克隆的工作量等。因此,后来出现了谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)基因作为显性基因扩增选择标志的GS-CHO细胞(原宿主细胞为CHO-K1)。它可在不含谷氨酰胺的培养基中生长。可用目的基因(如单抗)和GS基因标记的载体转染,再通过蛋氨酸二甲基代砜(MSX)选择加压促进转染基因扩增,获得重组细胞株。GS细胞具有更高的扩增效率。该细胞1987年初次报道,细胞又被称为CHO -K1SV细胞。

CHO 细胞能用于表达各种复杂的重组蛋白。据统计,70% 以上的动物细胞表达药物产品都是以 CHO 细胞为表达宿主。2011年6月批准的27种单克隆抗体中,其中13种就是通过CHO细胞表达的,占了约50%的比例。

世界知名培养基生产厂家HiMedia公司开发生产了适合三种CHO细胞的无血清培养基,分别为:

GS-CHO无血清CHO培养基、CHO-DHFR-无血清CHO培养基和CHO-K1无血清CHO培养基。均无动物成分、化学限定(含碳酸氢钠和Pluronic F-68,不含谷氨酰胺,无菌过滤)

培养基套装由两部分组成:

A部分: 基础培养基(液体或干粉,可选一种)

B部分: 无血清生长添加剂

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